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金黃色葡萄球菌高通量快速檢測技術
2017年08月31日  

技術概述:高通量快速檢測技術是指一次可快速檢測多個樣品或對同一樣品進行多種檢測的技術。微生物的常規檢測方法是培養法,基本過程是首先培養和分離微生物,然后再進行生化鑒定,有時還需要進行血清學鑒別,整個過程通常需要3~7天時間,甚至更長的時間,其檢驗結果準確可靠,但費時費力。金黃色葡萄球菌紙片法將傳統方法中需要多次實驗才能完成的任務一次完成,并在15小時~24小時內獲得結果,從而大大節約樣品分析時間。

增產增效情況:農產品、食品快速檢測技術,作為其質量安全監管的重要手段,對及時開展監測、了解我區酥油、糌粑、糕點、生熟食品等微生物污染狀況具有重要意義。通過監管手段的更新,為監督和保障食品衛生提供技術支撐,有效促進食源性疾病的及時發現和防控,將產生巨大社會經濟效益。

技術要點:

1、操作方法

(1)樣品處理:取樣品25毫升(克)放入含有225毫升滅菌磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的取樣罐或均質杯內,制成1:10的樣品勻液,調節樣品勻液pH至6.0~8.0。用1毫升滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1毫升,注入含有9毫升稀釋液的試管內,振搖后成為1:100的樣品勻液,以此類推,每次換一支吸管。

(2)接種:一般食品選2~3個稀釋度進行檢測,將金黃色葡萄球菌測試片(BT206)置于平坦實驗臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1毫升樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10秒左右,使培養基凝固,每個稀釋度接種兩片。做一片空白陰性對照。

(3)培養:將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養箱內,堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃,培養15 小時~24小時。

2、結果判讀:培養后,測試片上紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌;呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現陽性菌落的樣本,最好用其他更為可靠的方法進行驗證,沒有條件的至少要再取樣重復檢驗一次。

3、計數原則及報告方式

(1)選擇菌落數在20~200個之間的紙片進行計數。

(2)若兩個稀釋度的菌落數均在20~200之間,則取其平均菌落數乘以稀釋倍數,即為每毫升(或每克)樣品中金黃色葡萄球菌數。

(3)如果所有稀釋度的測試片上的菌落數都小于20,則計數稀釋度最低的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之;如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數報告之。

(4)如果所有稀釋度的菌落數都大于200,計數最高稀釋度的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。計數菌落數大于200的測試片時,也可計數一個或兩個具有代表性的方格內的菌落數,換算成單個方格內的菌落數后乘以20(濾紙區面積為20平方厘米),即為測試片上估算的菌落數。報告單位以CFU/毫升(或CFU/克)表示。

適宜區域:適宜全區各地。

技術依托單位:西藏自治區農牧科學院質量標準與檢測研究所

通訊地址:西藏拉薩市金株西路149號區農科院質標所(綜合實驗樓)

郵政編碼:850032

聯系人:李穎 達瓦卓瑪

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